小脑颗粒细胞和肿瘤原代细胞提取物

培养步骤:
一．培养基及培养冻存条件准备：
1）准备MEM培养基(MEM:GIBCO,货号11095-080)，85%；北美胎牛血清(United States，GIBCO，货号16000-044)，15%。
2）培养条件： 气相：空气，95%；二氧化碳，5%。 温度：37摄氏度，培养箱湿度为70%-80%。
3）冻存液：90%*培养基，10%DMSO，现用现配。液氮储存。
二．细胞处理：
1）复苏细胞：将含有1mL细胞悬液的冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻，加入4mL培养基混合均匀。在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入培养瓶中培养过夜（或将细胞悬液加入10cm皿中，加入约8ml培养基，培养过夜）。第二天换液并检查细胞密度。
2）细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。
对于贴壁细胞，传代可参考以下方法：
1.弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。
2.加2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培养瓶中，置于37℃培养箱中消化1-2分钟，然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加少量培养基终止消化。
3.按6-8ml/瓶补加培养基，轻轻打匀后吸出，在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养液后吹匀。
4.将细胞悬液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。
3）细胞冻存：待细胞生长状态良好时，可进行细胞冻存。贴壁细胞冻存时，弃去培养基后加入少量胰酶，细胞变圆脱落后，加入约1ml含血清的培养基后加入冻存管中，再添加10%DMSO后进行冻存。

人小脑颗粒细胞和肿瘤原代细胞提取物是从人原代小脑颗粒细胞和肿瘤细胞中提取的，人原代小脑颗粒细胞和肿瘤细胞分别从正常人小脑组织和肿瘤组织中制备。正常人小脑组织和肿瘤组织采集自各地方医院，采集工作根据IRB 和 HIPAA批准的方案进行。所有的产品在发货之前均经过严格的QA/QC流程以确保其质量。这些产品可以直接用于基因克隆，表达图谱分析以及各种分子生物学实验的研究。
总RNA制备：利用Qiagen RNeasy Kit的Trizol试剂分离RNA，然后用Qiagen RNA Clean Kit进行纯化。公司提供的总RNA样品附有RNA样品总浓度、总含量、电泳照片、OD值测定结果等。

cDNA制备：纯化后的总RNA来合成cDNA链，以50ul总反应体系进行逆转录，体系中包括MMLV反转录酶和随机引物以及10mg总RNA。68℃反应10min 后终止RT反应。利用1x RT Buffer 运输cDNA，1 ul cDNA 足够做一次PCR反应。所有cDNA产品在订单发货之前都经过了严格的QA/QC分析，保证了产品的质量。

蛋白制备：利用改良型RIPA Buffer (50mMTris, pH7.2, 150mM NaCl, 1mM EDTA, 1mM EGTA, 1% NP-40 , 1mM Na3VO4, 5mM NaF, 400uM PMSF, 1ug/ml of Pepstatin A, 5ug/ml of Aprotinin, 5ug/ml of Leupeptin)制备小脑颗粒细胞和肿瘤原代组织裂解液，离心去除组织碎片，通过Bio-Rad蛋白检测试剂盒测定蛋白浓度，组织蛋白稀释后用非还原蛋白Buffer (50 mM Tris-HCl, pH 6.8, 5% Glycerol, 1% SDS, 0.002% Bromphenol Blue)添加5%β-巯基乙醇及PMSF，-80度保存。

潜在的应用： <1>已知基因的PCR克隆；<2>mRNA选择性剪接；<3>基因克隆与目标测序；<4> Western and Northern Blot；<5>蛋白检测与蛋白质组学；<6>芯片研究与表达图谱。

细胞分类：

一种：
是冻存产品，由氮直液接拿出，干冰运输给客户。一般不推荐这种，也较少使用这种方式，因为复苏手法对于细胞状态影响较大，一旦细胞状态不好，很难说是细胞自身不行，还是复苏没操作好；另外温度对细胞、基因功能状态影响很大，也不是细胞储存的方式，快递时间也很难控制，多种因素影响产品的质量；干冰运输需要额外添加400元的运费(顺丰)。
第二种：
是我们复苏好细胞，QC通过后，T-25灌满培养基常温运输给客户，排除复苏造成影响，常温运输也对细胞影响也不大，只需加25元运费(顺丰)。
质量保证：我们的细胞株来源于ATCC、ECACC、DSMZ、JCRB等，购买到货后，由我们实验室扩增、冻存，冻存的产品全部经过QC检测，100%进口来源，100%保证5代以内，活力>95%，无细菌、真菌、支原体污染。
细胞培养的优点：
1.研究的对象是活细胞
在实验过程中，根据要求可始终保持细胞活力，并可长时间监控、检测甚至定量评估一部分活细胞的情况，包括活细胞的形态、结构、生命活动等。
2.研究条件可以人为控制
pH、温度、氧气、二氧化碳、张力等物理化学的条件，可以根据实际需要进行人为的控制，同时，可以施加化学、物理、生物等因素作为条件而进行实验观察，这些因素同样可以处于严格控制之下。
3.研究的样本可以达到比较均一性
通过细胞培养一定代数后，所得到的细胞系则可以达到均一性而属于同一类型的细胞，需要时，可采用克隆化等方法使细胞达到纯化。
4.研究内容便于观察、检测和记录
采用各种研究技术：如倒置生物显微镜、荧光显微镜、电子显微镜、流式细胞术、激光共焦显微镜、免疫组织化学、原位杂交、同位素标记等各种仪器设备。
以下是公司正在热销的相关产品： 

0.094ng/mlPeiminine；贝母素糖类抗原19-9检测试盒

3.75pg/mlCabazitaxel；卡巴他赛糖类抗原125检测试盒

9.375pg/mlGefitinib；吉非替尼糖基化依的细胞黏附分子检测试盒

4.688pg/mlMadecassic acid；羟基积雪草糖化红蛋白A1c检测试盒

9.375pg/mlSodium Houttuyfonate；鱼腥草素钠糖化低密度脂蛋白检测试盒

0.938ng/mlLoganin；马钱苷糖化白蛋白检测试盒

37.5pg/mlPsoralidin；补骨脂定糖蛋白130检测试盒

0.094ng/mlCyanidin-3-O-Rutinoside；矢车菊素-3-O-芸香糖苷羰基还原酶[NADPH] 1检测试盒

0.094ng/mlNaringin dihydrochalcone；柚皮苷二查尔碳酐酶9检测试盒

9.375pg/mlCardamomin；豆蔻碳酐酶6检测试盒
小脑颗粒细胞和肿瘤原代细胞提取物管内皮生长因子C(VEGFC)检测试盒(酶联免疫吸附试验法)4-(三氟基)-1H-咪唑

白介素12B(IL12B)检测试盒(酶联免疫吸附试验法)2-基-4-三氟基咪唑

管内皮生长因子B(VEGFB)检测试盒(酶联免疫吸附试验法)2-氨基咪唑盐

白介素12A(IL12A)检测试盒(酶联免疫吸附试验法)奥当卡替(MK-0822)

管内皮生长因子B(VEGFB)检测试盒(酶联免疫吸附试验法)4-硝基儿茶酚

尿激酶型纤溶酶原激活因子受体(uPAR)检测试盒(酶联免疫吸附试验法)4-硝基儿茶酚

尿激酶型纤溶酶原激活因子受体(uPAR)检测试盒(酶联免疫吸附试验法)曲格列

尿激酶型纤溶酶原激活因子(uPA)检测试盒(酶联免疫吸附试验法)盐阿糖胞苷

尿激酶型纤溶酶原激活因子(uPA)检测试盒(酶联免疫吸附试验法)盐阿糖胞苷(标准品)

小板生成素(TPO)检测试盒(酶联免疫吸附试验法)盐马尼地平

肿瘤坏死因子β(TNFβ)检测试盒(酶联免疫吸附试验法)盐马尼地平(标准品)

组织金属蛋白酶抑制因子4(TIMP4)检测试盒(酶联免疫吸附试验法)二睾,雄诺龙

组织金属蛋白酶抑制因子4(TIMP4)检测试盒(酶联免疫吸附试验法)多拉菌素

组织金属蛋白酶抑制因子3(TIMP3)检测试盒(酶联免疫吸附试验法)3,3,5-三碘-L-状腺原氨，碘塞罗宁

组织金属蛋白酶抑制因子3(TIMP3)检测试盒(酶联免疫吸附试验法)Corylifol A(标准品)