肺上皮细胞和肿瘤原代细胞提取物

培养步骤:
一．培养基及培养冻存条件准备：
1）准备MEM培养基(MEM:GIBCO,货号11095-080)，85%；北美胎牛血清(United States，GIBCO，货号16000-044)，15%。
2）培养条件： 气相：空气，95%；二氧化碳，5%。 温度：37摄氏度，培养箱湿度为70%-80%。
3）冻存液：90%*培养基，10%DMSO，现用现配。液氮储存。
二．细胞处理：
1）复苏细胞：将含有1mL细胞悬液的冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻，加入4mL培养基混合均匀。在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入培养瓶中培养过夜（或将细胞悬液加入10cm皿中，加入约8ml培养基，培养过夜）。第二天换液并检查细胞密度。
2）细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。
对于贴壁细胞，传代可参考以下方法：
1.弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。
2.加2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培养瓶中，置于37℃培养箱中消化1-2分钟，然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加少量培养基终止消化。
3.按6-8ml/瓶补加培养基，轻轻打匀后吸出，在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养液后吹匀。
4.将细胞悬液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。
3）细胞冻存：待细胞生长状态良好时，可进行细胞冻存。贴壁细胞冻存时，弃去培养基后加入少量胰酶，细胞变圆脱落后，加入约1ml含血清的培养基后加入冻存管中，再添加10%DMSO后进行冻存。

人肺上皮细胞和肿瘤原代细胞提取物是从人原代肺上皮细胞和肿瘤细胞中提取的，人原代肺上皮细胞和肿瘤细胞分别从正常人肺组织和肿瘤组织中制备。正常人肺组织和肿瘤组织采集自各地方医院，采集工作根据IRB 和 HIPAA批准的方案进行。所有的产品在发货之前均经过严格的QA/QC流程以确保其质量。这些产品可以直接用于基因克隆，表达图谱分析以及各种分子生物学实验的研究。
总RNA制备：利用Qiagen RNeasy Kit的Trizol试剂分离RNA，然后用Qiagen RNA Clean Kit进行纯化。公司提供的总RNA样品附有RNA样品总浓度、总含量、电泳照片、OD值测定结果等。

cDNA制备：纯化后的总RNA来合成cDNA链，以50ul总反应体系进行逆转录，体系中包括MMLV反转录酶和随机引物以及10mg总RNA。68℃反应10min 后终止RT反应。利用1x RT Buffer 运输cDNA，1 ul cDNA 足够做一次PCR反应。所有cDNA产品在订单发货之前都经过了严格的QA/QC分析，保证了产品的质量。

蛋白制备：利用改良型RIPA Buffer (50mMTris, pH7.2, 150mM NaCl, 1mM EDTA, 1mM EGTA, 1% NP-40 , 1mM Na3VO4, 5mM NaF, 400uM PMSF, 1ug/ml of Pepstatin A, 5ug/ml of Aprotinin, 5ug/ml of Leupeptin)制备肺上皮细胞和肿瘤原代组织裂解液，离心去除组织碎片，通过Bio-Rad蛋白检测试剂盒测定蛋白浓度，组织蛋白稀释后用非还原蛋白Buffer (50 mM Tris-HCl, pH 6.8, 5% Glycerol, 1% SDS, 0.002% Bromphenol Blue)添加5%β-巯基乙醇及PMSF，-80度保存。

潜在的应用： <1>已知基因的PCR克隆；<2>mRNA选择性剪接；<3>基因克隆与目标测序；<4> Western and Northern Blot；<5>蛋白检测与蛋白质组学；<6>芯片研究与表达图谱。

细胞分类：

一种：
是冻存产品，由氮直液接拿出，干冰运输给客户。一般不推荐这种，也较少使用这种方式，因为复苏手法对于细胞状态影响较大，一旦细胞状态不好，很难说是细胞自身不行，还是复苏没操作好；另外温度对细胞、基因功能状态影响很大，也不是细胞储存的方式，快递时间也很难控制，多种因素影响产品的质量；干冰运输需要额外添加400元的运费(顺丰)。
第二种：
是我们复苏好细胞，QC通过后，T-25灌满培养基常温运输给客户，排除复苏造成影响，常温运输也对细胞影响也不大，只需加25元运费(顺丰)。
质量保证：我们的细胞株来源于ATCC、ECACC、DSMZ、JCRB等，购买到货后，由我们实验室扩增、冻存，冻存的产品全部经过QC检测，100%进口来源，100%保证5代以内，活力>95%，无细菌、真菌、支原体污染。
细胞培养的优点：
1.研究的对象是活细胞
在实验过程中，根据要求可始终保持细胞活力，并可长时间监控、检测甚至定量评估一部分活细胞的情况，包括活细胞的形态、结构、生命活动等。
2.研究条件可以人为控制
pH、温度、氧气、二氧化碳、张力等物理化学的条件，可以根据实际需要进行人为的控制，同时，可以施加化学、物理、生物等因素作为条件而进行实验观察，这些因素同样可以处于严格控制之下。
3.研究的样本可以达到比较均一性
通过细胞培养一定代数后，所得到的细胞系则可以达到均一性而属于同一类型的细胞，需要时，可采用克隆化等方法使细胞达到纯化。
4.研究内容便于观察、检测和记录
采用各种研究技术：如倒置生物显微镜、荧光显微镜、电子显微镜、流式细胞术、激光共焦显微镜、免疫组织化学、原位杂交、同位素标记等各种仪器设备。
以下是公司正在热销的相关产品： 

0.188ng/mlAmiodarone HCl；盐胺碘胎盘性酶检测试盒

37.5pg/mlUridine 5'-Diphosphate Trisodium Salt/UTP.Na3；尿苷-5'-三三钠 胎盘蛋白13检测试盒

5.625ng/mlBavachin；补骨脂二黄/补骨脂素胎盘催乳素检测试盒

4.688U/mlMaackiain；高丽槐素胎儿红蛋白检测试盒

0.094ng/mlDiosmetin-7-O-β-D-glucopyranoside；香叶木素-7-O-葡萄糖苷胎儿纤连蛋白检测试盒

18.75pg/mlRosmarinic acid；迷迭香锁链素检测试盒

1.875ng/mlProcyanidin B1；原花青素B1羧基氨检测试盒

0.469ng/mlArctiin；牛蒡子苷/牛蒡苷羧化基质谷氨蛋白检测试盒

0.094ng/mlParthenolide；小白菊内酯羧化不全骨钙素检测试盒

9.375pg/mlCalycosin；毛蕊黄髓样分化因子88检测试盒
肺上皮细胞和肿瘤原代细胞提取物肌肌激酶(CKM)检测试盒(酶联免疫吸附试验法)雄烯二

骨保护素(OPG)检测试盒(酶联免疫吸附试验法)雄烯二（标准品）

胆囊收缩素A受体(CCKAR)检测试盒(酶联免疫吸附试验法)赤芝A

基质金属蛋白酶8(MMP8)检测试盒(酶联免疫吸附试验法)维生素E琥珀酯;D-α-生育酚琥珀酯

基质金属蛋白酶8(MMP8)检测试盒(酶联免疫吸附试验法)伊沙匹隆

基质金属蛋白酶7(MMP7)检测试盒(酶联免疫吸附试验法)5-基胞嘧啶

基质金属蛋白酶7(MMP7)检测试盒(酶联免疫吸附试验法)7-基喜树(标准品)

基质金属蛋白酶3(MMP3)检测试盒(酶联免疫吸附试验法)7-基喜树

基质金属蛋白酶2(MMP2)检测试盒(酶联免疫吸附试验法)(+)-(3R)-7-[4-(4-氟苯基)-6-基-2-(N-基-N-磺酰氨基)嘧啶-5-基]-3-羟基-5-氧代-(6E)-己烯酯

基质金属蛋白酶13(MMP13)检测试盒(酶联免疫吸附试验法)(-)-Blebbistatin

基质金属蛋白酶13(MMP13)检测试盒(酶联免疫吸附试验法)奈达铂;顺糖氨铂

基质金属蛋白酶10(MMP10)检测试盒(酶联免疫吸附试验法)SB 203580

基质金属蛋白酶10(MMP10)检测试盒(酶联免疫吸附试验法)6-氨基-3-基嘌呤(3MA)；细胞自噬抑制

基质金属蛋白酶1(MMP1)检测试盒(酶联免疫吸附试验法)黄嘌呤；2,6-二羟基嘌呤；

基质金属蛋白酶1(MMP1)检测试盒(酶联免疫吸附试验法)Necrostatin1