人椎间盘髓核细胞提取物

培养步骤:
一．培养基及培养冻存条件准备：
1）准备MEM培养基(MEM:GIBCO,货号11095-080)，85%；北美胎牛血清(United States，GIBCO，货号16000-044)，15%。
2）培养条件： 气相：空气，95%；二氧化碳，5%。 温度：37摄氏度，培养箱湿度为70%-80%。
3）冻存液：90%*培养基，10%DMSO，现用现配。液氮储存。
二．细胞处理：
1）复苏细胞：将含有1mL细胞悬液的冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻，加入4mL培养基混合均匀。在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入培养瓶中培养过夜（或将细胞悬液加入10cm皿中，加入约8ml培养基，培养过夜）。第二天换液并检查细胞密度。
2）细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。
对于贴壁细胞，传代可参考以下方法：
1.弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。
2.加2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培养瓶中，置于37℃培养箱中消化1-2分钟，然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加少量培养基终止消化。
3.按6-8ml/瓶补加培养基，轻轻打匀后吸出，在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养液后吹匀。
4.将细胞悬液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。
3）细胞冻存：待细胞生长状态良好时，可进行细胞冻存。贴壁细胞冻存时，弃去培养基后加入少量胰酶，细胞变圆脱落后，加入约1ml含血清的培养基后加入冻存管中，再添加10%DMSO后进行冻存。

人椎间盘髓核细胞提取物是从人椎间盘髓核细胞提取的，人椎间盘髓核细胞从正常人椎间盘髓核组织制备。正常人椎间盘髓核组织采集自各地方医院，采集工作根据IRB 和 HIPAA批准的方案进行。所有的产品在发货之前均经过严格的QA/QC流程以确保其质量。这些产品可以直接用于基因克隆，表达图谱分析以及各种分子生物学实验的研究。
总RNA制备：利用Qiagen RNeasy Kit的Trizol试剂分离RNA，然后用Qiagen RNA Clean Kit进行纯化。公司提供的总RNA样品附有RNA样品总浓度、总含量、电泳照片、OD值测定结果等。

cDNA制备：纯化后的总RNA来合成cDNA链，以50ul总反应体系进行逆转录，体系中包括MMLV反转录酶和随机引物以及10mg总RNA。68℃反应10min 后终止RT反应。利用1x RT Buffer 运输cDNA，1 ul cDNA 足够做一次PCR反应。所有cDNA产品在订单发货之前都经过了严格的QA/QC分析，保证了产品的质量。

蛋白制备：利用改良型RIPA Buffer (50mMTris, pH7.2, 150mM NaCl, 1mM EDTA, 1mM EGTA, 1% NP-40 , 1mM Na3VO4, 5mM NaF, 400uM PMSF, 1ug/ml of Pepstatin A, 5ug/ml of Aprotinin, 5ug/ml of Leupeptin)制备人椎间盘髓核组织裂解液，离心去除组织碎片，通过Bio-Rad蛋白检测试剂盒测定蛋白浓度，组织蛋白稀释后用非还原蛋白Buffer (50 mM Tris-HCl, pH 6.8, 5% Glycerol, 1% SDS, 0.002% Bromphenol Blue)添加5%β-巯基乙醇及PMSF，-80度保存。

潜在的应用： <1>已知基因的PCR克隆；<2>mRNA选择性剪接；<3>基因克隆与目标测序；<4> Western and Northern Blot；<5>蛋白检测与蛋白质组学；<6>芯片研究与表达图谱。

细胞分类：

一种：
是冻存产品，由氮直液接拿出，干冰运输给客户。一般不推荐这种，也较少使用这种方式，因为复苏手法对于细胞状态影响较大，一旦细胞状态不好，很难说是细胞自身不行，还是复苏没操作好；另外温度对细胞、基因功能状态影响很大，也不是细胞储存的方式，快递时间也很难控制，多种因素影响产品的质量；干冰运输需要额外添加400元的运费(顺丰)。
第二种：
是我们复苏好细胞，QC通过后，T-25灌满培养基常温运输给客户，排除复苏造成影响，常温运输也对细胞影响也不大，只需加25元运费(顺丰)。
质量保证：我们的细胞株来源于ATCC、ECACC、DSMZ、JCRB等，购买到货后，由我们实验室扩增、冻存，冻存的产品全部经过QC检测，100%进口来源，100%保证5代以内，活力>95%，无细菌、真菌、支原体污染。
细胞培养的优点：
1.研究的对象是活细胞
在实验过程中，根据要求可始终保持细胞活力，并可长时间监控、检测甚至定量评估一部分活细胞的情况，包括活细胞的形态、结构、生命活动等。
2.研究条件可以人为控制
pH、温度、氧气、二氧化碳、张力等物理化学的条件，可以根据实际需要进行人为的控制，同时，可以施加化学、物理、生物等因素作为条件而进行实验观察，这些因素同样可以处于严格控制之下。
3.研究的样本可以达到比较均一性
通过细胞培养一定代数后，所得到的细胞系则可以达到均一性而属于同一类型的细胞，需要时，可采用克隆化等方法使细胞达到纯化。
4.研究内容便于观察、检测和记录
采用各种研究技术：如倒置生物显微镜、荧光显微镜、电子显微镜、流式细胞术、激光共焦显微镜、免疫组织化学、原位杂交、同位素标记等各种仪器设备。
以下是公司正在热销的相关产品： 

Qualitative人EJ抗体/抗甘氨酰tRNA合成酶抗体(EJ/GlyRS)ELISA试盒 pUNO1-hLGALS9a

Qualitative人抗双链DNA抗体/天然DNA抗体(dsDNA)ELISA试盒pUNO1-hOLR1a

Qualitative人抗利尿激素/管加压素/精氨加压素(ADH/VP/AVP)ELISA试盒pUNO1-hPPARGa

Qualitative人抗DNA酶B抗体(anti-DNase B)ELISA试盒 pUNO1-hPPARGb

0.094ng/ml人胎儿红蛋白(HBF)ELISA试盒 pUNO1-hSLC15A2a

9.4ng/ml人抗巨细胞病抗体IgM(anti-CMV IgM)ELISA试盒 pUNO1-hSTIM1b

46.9pg/ml

人抗巨细胞病抗体IgG(anti-CMV IgG)ELISA试盒 pUNO1-hTIGIT

9.4pg/ml人抗环胍氨肽抗体(CCP)ELISA试盒pUNO1-hTMED10

0.094ng/ml人抗补体1q抗体(C1q)ELISA试盒 pUNO1-hTMED2a

0.094ng/ml人抗人绒毛膜促性腺激素抗体(AhCGAb)ELISA试盒 pUNO1-hVISTA-D187
人椎间盘髓核细胞提取物清淀粉样P物质(SAP)检测试盒(酶联免疫吸附试验法)桑色素(标准品)

谷胱甘肽S转移酶μ2(GSTμ2)检测试盒(酶联免疫吸附试验法)沙苑子苷A（标准品）

谷胱甘肽S转移酶α4(GSTα4)检测试盒(酶联免疫吸附试验法)苷(标准品)

成肌分化蛋白(MyoD)检测试盒(酶联免疫吸附试验法)素(标准品)

Smad同源物3(Smad3)检测试盒(酶联免疫吸附试验法)山栀苷酯（标准品）

膜联蛋白A11(ANXA11)检测试盒(酶联免疫吸附试验法)商陆皂苷(标准品)

膜联蛋白A1(ANXA1)检测试盒(酶联免疫吸附试验法)芍药内酯苷(标准品）

过氧化还原酶5(PRDX5)检测试盒(酶联免疫吸附试验法)蛇床子素（标准品）

氧化低密度脂蛋白(OxLDL)检测试盒(酶联免疫吸附试验法)蛇床子素

桥粒斑蛋白(DSP)检测试盒(酶联免疫吸附试验法)麝香（标准品）

管内皮生长因子165(VEGF165)检测试盒(酶联免疫吸附试验法)升麻醇-3-O-β-D-吡喃木糖苷（标准品）

促卵泡素(FSH)检测试盒(酶联免疫吸附试验法)升麻素（标准品）

胃动蛋白1(GKN1)检测试盒(酶联免疫吸附试验法)升麻素苷（标准品）

α2-巨球蛋白(α2M)检测试盒(酶联免疫吸附试验法)升麻醇-3-O-α-L-拉伯糖苷（标准品）

纤维胶凝蛋白1(FCN1)检测试盒(酶联免疫吸附试验法)圣草次苷（标准品）