倍赞氏金蝇探针法荧光定量PCR检测试剂盒

储存条件：

14℃或－20℃样品收集、处理及保存方法
1. 血清：使用不含热原和内毒素的试管，操作过程中避免任何细胞刺激，收集血液后，3000 转离心10 分钟将血清和红细胞迅速小心地分离。
2. 血浆：EDTA、柠檬酸盐或肝素抗凝。3000 转离心30 分钟取上清。
3. 细胞上清液：3000 转离心10 分钟去除颗粒和聚合物。
4. 组织匀浆：将组织加入适量生理盐水捣碎。3000 转离心10 分钟取上清。
5. 保存：如果样本收集后不及时检测，请按一次用量分装，冻存于-20℃，避免反复冻融，在室温下解冻并确保样品均匀地充分解冻。

探针法：
倍赞氏金蝇探针法荧光定量PCR检测试剂盒aqMan 探针是一种寡核苷酸探针，它的荧光与目的序列的扩增相关。它与目标序列上游引物和下游引物之间的序列配对。荧光基团连接在探针的5’ 末端，而淬灭剂则在3’ 末端。当完整的探针与目标序列配对时，荧光基团发射的荧光因与3’ 端的淬灭剂接近而被淬灭。但在进行延伸反应时，聚合酶的5’ 外切酶活性将探针进行酶切，使得荧光基团与淬灭剂分离。随着扩增循环数的增加，释放出来的荧光基团不断积累。因此荧光强度与扩增产物的数量呈正比关系。相对于染料法,Taqman探针法具有更高的特异性和准确性。
使用方法：
一、样品DNA的制备
用自选方法提取细菌样品DNA。注意：DNA纯化方法是决定检测灵敏度的关键因素。如果不能很好纯化样品DNA，后面的PCR再灵敏也不能提高整体检测灵敏度。
二、制备O157:H7标准曲线（以10-10E6这6个10倍稀释度为例。由于标准品浓度非常高，因此下列稀释操作一定要在独立的区域进行，千万不能污染样品或本试剂盒的其他成分）。为增加产品稳定性和避免扩散传染性病原，本产品不提供活体病毒做阳性对照，只提供没有传染性的、可以直接使用的DN段作为阳性对照。
1. 标记6个离心管，分别为6，5，4，3，2和1号。
2. 用带芯枪头分别加入45 μL超纯水（用带芯枪头，下同）。
3. 先将本试剂盒提供的阳性对照用TE缓冲液或超纯水10倍梯度稀释到10E7拷贝/μL（注：请不要将本试剂盒提供的标准品一次性稀释至10E7拷贝/μL，建议每次稀释10倍，梯度稀释至10E7拷贝/μL）。
4. 在6号管中加入5 μL 10E7拷贝/μL的O157:H7阳性对照(上步稀释所得)，充分震荡1分钟，得10E6拷贝/μL的阳性对照。
5. 换枪头，从6号管中取5 μL溶液到5号管中，充分震荡1分钟，得10E5拷贝/μL的阳性对照。
6. 换枪头，从5号管中取5 μL溶液到4号管中，重复上面的操作直到得到6个稀释度的阳性对照。
7. NC管中不加任何阳性对照。
8. 从1-6号管中分别取5 μL和待测样品一起进行定量PCR（见下步），每个样品做3次重复。PCR后得到每个阳性对照稀释样品的荧光PCR Ct值，并以之为纵轴，以浓度的对数值为横轴，绘制标准曲线。
探针荧光定量PCR试剂盒原理分析如下图：

应用案例：
样品 DNA 的制备
1.用自选方法纯化样品的 DNA，本试剂盒跟市场上大多数病毒 DNA 提取试剂盒兼 容。。也可以选购本公司的一管式病毒 DNAout 或其升级版柱式病毒 DNAout。 本试剂盒免费赠送 15 次 DNA 病毒裂解液试用装（一管式病毒 DNAout 的成分）。
稀释阳性对照（以 10E2-10E7 这 6 个 10 倍稀释度为例。由于标准品浓度非常高，因此下列稀释操作一定要在独立的区域进行，千万不能污染样品或本试剂盒的其他成分）。为增加产品稳定性和避免扩散传染性病原，本产品不提供活体样品做阳性对照，只提供可以直接使用的长为 86bp 的 DN段作为阳性对照。
2.标记 6 个离心管，分别为 7，6，5，4，3，2。
3.用带芯枪头分别加入 45 μL 模板稀释液（用带芯枪头，下同）。
4.在 7 号管中加入 5 μL 1×10E8 拷贝/μL 的阳性对照，充分震荡 1 分钟，得1×10E7 拷贝/μL 的阳性对照。放冰上待用。5.换枪头，在 6 号管中加入 5 μL 1×10E7 拷贝/μL 的阳性对照(上步稀释所得)，充分震荡 1 分钟，得 1×10E6 拷贝/μL 的阳性对照。放冰上待用。
6.换枪头，在 5 号管中加入 5 μL 1×10E6 拷贝/μL 的阳性对照到 5 号管中，充分震荡 1 分钟，得 1×10E5 拷贝/μL 的阳性对照。放冰上待用。
7.换枪头，在 4 号管中加 5 μL 1×10E5 拷贝/μL 的阳性对照到 4 号管中，得1×10E4 拷贝/μL 的阳性对照。放冰上待用
8.重复上面的操作直到得到 6 个稀释度的阳性对照。放冰上待用。设置 qPCR 反应（20  μL 体系，在样品制备室进行）
9.在 PCR 管中加入下列成分。
以下是公司正在热销的产品：

3-苯酰胚胎干细胞未分化定性荧光检测试盒

4--2-基苯腈胚胎干细胞内胚层（endoderm）细胞分化荧光检测试盒

四基亚基二酸脂胚胎干细胞中胚层（mesoderm）细胞分化荧光检测试盒

3,4-二吡啶胚胎干细胞外胚层（ectoderm）细胞分化荧光检测试盒

4-(4-氰苯基)吗啉胚胎干细胞心肌细胞（cardiomyocyte）定向分化试盒

6-喹啉-8-羧酸胚胎干细胞神经细胞（neuron）定向分化试盒

炔基苯磺酸胚胎干细胞内皮细胞（endothelial）定向分化试盒

七基二硅氮烷胚胎干细胞造血细胞（hematopoitic）定向分化试盒

倍赞氏金蝇探针法荧光定量PCR检测试剂盒1-(3-苯基)-4-(3-基)盐酸盐胚胎干细胞胰岛细胞定向分化试盒

4-氟-2-(三氟基)苯醇肿瘤干细胞荧光定性检测试盒

对肉桂醛动物肝星状细胞分离培养试盒

N-基二胺动物肝细胞分离培养试盒

4-羧基-2-硝基苯硼酸动物新生心肌细胞分离培养试盒

3--4--5-硝基吡啶动物脂肪组织细胞分离培养试盒

二基二酸二酯动物肾上腺组织细胞分离培养试盒APG4B/AUTL1  自噬相关蛋白4B抗体金银花

Apg12  自噬相关蛋白12抗体水蛭(蚂蟥)

Apg10  自噬相关蛋白10抗体芫花

APEX2  嘌呤嘧啶核酸内切酶2抗体槐花

Apelin/Apelin 13  脂肪炎症因子Apelin抗体羚羊角

Apelin receptor/AGTRL1  血管紧缩素样蛋白1抗体川牛膝

APE/Girdin  肌动蛋白结合蛋白Girdin抗体牛膝

APC70/CRSP70  转录激活蛋白crsp70抗体苏木

APC6/CDC16  细胞分裂周期蛋白16抗体杜仲叶

APC5  细胞分裂周期蛋白5抗体忍冬藤

APC/Adenomatous Polyposis Coli  腺瘤样息肉抗体知母

APBB1/Fe65 protein  铁蛋白Fe65抗体狗脊

APBA3/Mint3/X11gamma  β淀粉样前体蛋白结合蛋白3抗体枸杞子

APAF1(NT)  凋亡蛋白活性因子-1抗体（N端）胡黄连

APAF1(CT)  凋亡蛋白活性因子-1抗体（C端）莱菔子

注意事项：1．基础程序；2．扩增温度和延伸温度；3．反应时间；4．循环次数；5．PCR 反应液的配制；6．PCR技术的基本原理；7．PCR的反应动力学；8．PCR扩增产物；9．PCR反应体系与反应条件。