实时荧光PCR试剂盒的测量原理包括以下几个方面
浏览次数:283发布日期:2024-01-09
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是用于实时定量PCR(Polymerase Chain Reaction)反应的试剂盒。实时PCR是一种通过检测靶基因荧光信号的强度来实时监测PCR反应进程的技术。测量原理主要包括以下几个方面:
1.DNA扩增:实时PCR试剂盒中包含了DNA聚合酶,其能够与反应体系中的模板DNA结合,并在适当的温度下进行DNA链的合成和扩增。
2.靶基因检测:加入了与目标基因序列相对应的引物(primer)和探针(probe)。引物是一种短的DNA片段,能够与目标基因的特定序列互补结合,从而在PCR反应中起到引导DNA合成的作用。探针是一种含有荧光染料和荧光信号猝灭物(quencher)的DNA序列,其与目标基因的特定序列互补结合后,荧光信号被猝灭,从而实现对PCR产物的检测。
3.荧光信号检测:在实时PCR过程中,扩增产物数量随着反应的进行逐渐增加,同时探针与扩增产物结合,使荧光信号减弱。通过实时荧光PCR仪器可以在每个PCR循环后测量荧光信号的强度,根据荧光信号的变化可以确定扩增产物的数量。实时PCR仪器一般会设置阈值来判断是否存在目标基因,当荧光信号强度超过阈值时,表示PCR反应中存在目标基因。
4.定量测量:通过测量PCR循环次数(CycleThreshold,CT值)来实现基因定量。CT值是从荧光曲线中判断的某一点,即在此点上荧光信号超过阈值。CT值越小,说明目标基因的起始模板数量越多,反之则起始模板数量较少。通过与已知浓度的标准曲线进行比较,可以计算出样本中目标基因的初始数量。
实时荧光PCR试剂盒的应用非常广泛,包括:
1.基因表达分析:可以检测和定量分析特定基因在不同组织、细胞或时间点中的表达水平。
2.突变检测:可以用于检测和鉴定DNA序列中的突变或基因突变体。
3.微生物检测:可以用于检测和鉴定病原微生物、细菌或病毒的存在和数量。
4.基因拷贝数定量:可以用于检测和定量分析基因的拷贝数变化,如染色体异常等。