RT-PCR试剂盒实验请注意

　　RT-PCR试剂盒反应就是从RNA反转录至cDNA，然后通过PCR反应扩增cDNA的过程。Super一步法RT-PCR（AMV）试剂盒采用了一步反应法完成整个RT-PCR反应，即RNA-cDNA-PCR反应操作在同一反应体系中进行，反应过程中不需增加额外的步骤，就可完成整个RT-PCR反应，同时整个反应系统且含有电泳时所需要的试剂，可直接上样电泳。本试剂盒具有方便、简捷、灵敏度高、重复性好的特点，可适用于各种动、植物、病毒RNA的PCR检测。

　　RT-PCR试剂盒实验请注意：

　　1.用户可根据自己的情况调整优化PCR反应扩增参数：

　　·退火温度：可根据实际情况适当地提高或降低退火温度（50℃~65℃）。

　　·延伸时间：延伸时间因目的序列长度的不同而不同

　　·循环次数：cDNA量较少时，循环次数可增加为40~50次

　　·调整镁离子的浓度

　　2.用户可根据本试剂盒提供的β-actin引物（阳性对照）验证RT-PCR体系是否良好（选做）：

　　（1）使用前每个组份轻轻混匀，然后2000rpm离心20s；

　　（2）灭过菌且无核酸酶的0.2mlPCR管，依次加入

　　（3）轻混匀，2000rpm离心20s后进行RT-PCR反应；RT反应条件：42℃保温1hr PCR扩增条件：94°C，5min；

　　94°C变性，30sec；

　　54°C退火，45s；

　　72°C延伸，1min；

　　33个循环；

　　72°C，10min，

　　（4）应结束后，取反应液10uL进行琼脂糖凝胶电泳，确认β-actin基因目的产物片断为359bp。

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