PCR扩增试剂盒基于一种常温恒温核酸快速扩增技术

　　PCR扩增试剂盒基于一种常温恒温核酸快速扩增技术：在常温恒温下，特殊修饰的反转录酶利用特异性引物DNA和模板RNA合成cDNA链，反应体系中的重组酶、单链DNA结合蛋白和DNA聚合酶以新合成的cDNA链为模板进行快速核酸扩增反应。本试剂盒在42?C下，依赖核酸外切酶的作用，加入根据模版设计的特异的分子探针，使用荧光监测设备能实现对目标片段扩增过程的实时监控。适用于实验室级别的RNA扩增以及其他检测用途的RNA扩增使用。
 

　　PCR扩增试剂盒操作需要提前30分钟将试剂盒所需组分取出，室温融化，震荡混匀。
 

　　1)每个干粉反应管加入29.4μLAbuffer(注意：Abuffer需融化混匀，否则会对实验效果产生影响)；
 

　　2)每个反应管分别加入2μL上游引物、2μL下游引物和0.6μL探针(引物和探针浓度为10μM，对于多个反应、步骤1和步骤2可以混合后再分装至反应管中)；
 

　　3)向反应管中依次加入11.5μLddH2O和2μL核酸模板(可根据核酸浓度调整加入的核酸模板体积，并相应调整加入的ddH2O体积，至模板与ddH2O总体积为13.5μL)；
 

　　4)向反应管中加入2.5μLBbuffer并充分混合(对于多个反应，建议将Bbuffer加至反应管的盖子内侧，上下颠倒反应管8-10次混匀)；
 

　　5)混匀后，将反应液甩(或快速离心)至管子底部，然后立即将反应管放入荧光检测设备中。荧光检测程序设置为：恒温42C；每30s采集一次FAM通道(信号采集通道的选择与荧光探针设计一致)荧光值；反应时间20mins。