定量PCR检测试剂盒实验方法

　　定量PCR检测试剂盒常用于荧光免疫法中标记抗原或抗体，亦可用于微环境，如表面活性剂胶束、双分子膜、蛋白质活性位点等处微观特性的探测。通常要求探针的摩尔吸光系数大，荧光量子产率高；荧光发射波长处于长波且有较大的斯托克斯位移；用于免疫分析时，与抗原或抗体的结合不应影响它们的活性。
 

　　定量PCR检测试剂盒实验方法：
 

　　1.取增菌液1ml加到l.5ml无菌离心管中，10，000rpm离心5min，弃去上清；加入50ulDNA提取液，充分混匀后沸水浴5min，13000rpm离心5min，取上清液进行检测或保存于-20C以待检测。
 

　　2.将PCR反应液置室温平衡，融化后取Taq酶，按2U/管加入Taq酶，即每个测试反应体系配制为：PCR反应液22.5ul+0.4u1Taq酶。
 

　　3.加入模板：将保存在-20C的核酸提取物置室温解冻，以13000rpm离心5min。阴、阳性对照使用前置室温解冻。在每个PCR反应管中分别加入步骤1中处理过的模板或阴、阳性对照各2u1，盖好管盖，置于PCR仪上，记录相应样品号。
 

　　4.上机扩增、检测区：反应条件为95C：3min，1个循环；95C：5sec，60C：40sec(信号采集)，40个循环。反应体系设为25u1。对于多通道荧光PCR仪，信号采集时设定为Fam荧光素。
 

　　定量PCR检测试剂盒使用注意事项：
 

　　1.本试剂盒仅用于体外检测和研究用途，开始使用前请仔细阅读本说明书全文。
 

　　2.实验必须严格分区操作：PCR前准备区一一准备实验试剂；样本处理区一一待测样本、模板处理；检测区一一PCR扩增、检测。
 

　　3.有关实验室管理规范请参照国家相关部门颁布的基因扩增实验室的管理规范执行。