1. 标准品的稀释与加样:在酶标包被板上设标准品孔10孔,在di一、第二孔中分别加标准品100μl,然后在di一、第二孔中加标准品稀释液50μl,混匀;然后从di一孔、第二孔中各取100μl分别加到第三孔和第四孔,再在第三、第四孔分别加标准品稀释液50μl,混匀;然后在第三孔和第四孔中先各取50μl弃掉,再各取50μl分别取50μl分别加到第七、第八孔中,再在第七、第八孔中分别加标准品稀释液50μl,混匀后从第七、第八孔中加到第五、第六孔中,再在第五、第六孔中分别加标准品稀释液50ul,混匀;混匀后从第五、第六孔中各分别取50μl加到第九、第十孔中,再在第九第十孔分别加标准品稀释液50μl,混匀后从第九第十孔中各取50μl弃掉。(稀释后各孔加样量都为50μl,浓度分别为180 ng/L,120 ng/L ,60 ng/L,30 ng/,15 ng/L)。
2. 加样:分别设空白孔(空白对照孔不加样品及酶标试剂,其余各步操作相同)、待测样品孔。在酶标包被板上待测样品孔中先加样品稀释液40μl,然后再加待测样品10μl(样品最终稀释度为5倍)。加样将样品加于酶标板孔底部,尽量不触及孔壁,轻轻晃动混匀。
3. 温育:用封板膜封板后置37℃温育30分钟。
4. 配液:将30(48T的20倍)倍浓缩洗涤液用蒸馏水30(48T的20倍)倍稀释后备用。
5. 洗涤:小心揭掉封板膜,弃去液体,甩干,每孔加满洗涤液,静置30秒后弃去,如此重复5次,拍干。
6. 加酶:每孔加入酶标试剂50μl,空白孔除外。
7. 温育:操作同3。
8. 洗涤:操作同5。
9. 显色:每孔先加入显色剂A50μl,再加入显色剂B50μl,轻轻震荡混匀,37℃避光显色15分钟.
10. 终止:每孔加终止液50μl,终止反应(此时蓝色立转黄色)。
11. 测定:以空白空调零,450nm波长依序测量各孔的吸光度(OD值)。 测定应在加终止液后15分钟。
高迁移率族蛋白1(HMG1)重组蛋白
睾素2(TIC2)重组蛋白
谷氨酸半胱氨酸连接酶(GCLM)重组蛋白
谷氨酸脱羧酶2(GAD2)重组蛋白
谷丙转氨酶(ALT)重组蛋白
谷胱甘肽S转移酶α1(GSTα1)重组蛋白
谷胱甘肽S转移酶α3(GSTα3)重组蛋白
谷胱甘肽S转移酶α4(GSTα4)重组蛋白
谷胱甘肽S转移酶θ1(GSTθ1)重组蛋白
谷胱甘肽S转移酶κ1(GSTκ1)重组蛋白
谷胱甘肽S转移酶μ2(GSTμ2)重组蛋白
谷胱甘肽S转移酶π1(GSTπ1)重组蛋白
骨保护素(OPG)重组蛋白
骨成型蛋白2(BMP2)重组蛋白
骨成型蛋白4(BMP4)重组蛋白
骨成型蛋白7(BMP7)重组蛋白
骨成型蛋白受体1A(BMPR1A)重组蛋白
骨成型蛋白受体1B(BMPR1B)重组蛋白
骨钙素(OC)重组蛋白
骨桥素(OPN)重组蛋白
骨涎蛋白(BSP)重组蛋白
骨形成蛋白6(BMP6)重组蛋白
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