荧光探针pcr试剂盒的相关知识点介绍

　　荧光探针pcr试剂盒的原理在于PCR扩增时在加入一对引物的同时加入一个特异性的荧光探针，该探针为一寡核苷酸，两端分别标记一个报告荧光基团和一个淬灭荧光基团。探针完整时，报告基团发射的荧光信号被淬灭基团吸收；刚开始时,探针结合在DNA任意一条单链上;PCR扩增时，Taq酶的5’端-3’端外切酶活性将探针酶切降解，使报告荧光基团和淬灭荧光基团分离，从而荧光监测系统可接收到荧光信号，即每扩增一条DNA链，就有一个荧光分子形成，实现了荧光信号的累积与PCR产物形成*同步。
 

　　常用于荧光免疫法中标记抗原或抗体，亦可用于微环境，如表面活性剂胶束、双分子膜、蛋白质活性位点等处微观特性的探测。通常要求探针的摩尔吸光系数大，荧光量子产率高；荧光发射波长处于长波且有较大的斯托克斯位移；用于免疫分析时，与抗原或抗体的结合不应影响它们的活性。
 

　　目前，荧光探针pcr试剂盒的方法主要有单点测定和电荷耦合装置(CCD)荧光成像(包括用于微区分析的激光共聚焦荧光显微镜成像)。由于光电倍增管点扫描时间较长，激光照射强度高，很难抓住荧光早期变化。而CCD荧光成像的面阵大，成像视野广，成像时间可以调节，因而检测效果比较好。
 

　　化学发光检测的特点是设备简单、操作简便、分析速度快及灵敏度高。化学发光成像分析(CLI)是将化学发光与成像技术相结合，从而具有分辨率高、多样品同时检测、光谱响应范围宽以及灵敏度高等特点。已广泛应用于凝胶、蛋白印记及微阵列芯片中的化学发光信号检测。