小鼠糖原合成酶激酶(GSK)ELISA试剂盒标本的采集与保存

小鼠糖原合成酶激酶(GSK)ELISA试剂盒标本的采集与保存:

1.         血清：

将收集于血清分离管的全血标本在室温放置 2 小时或 4oC 过夜，然后 1000×g 离心 20 分钟，取上清即可，或将上清置于-20oC 或-80oC 保存，但应避免反复冻融。

2.         血浆：

用 EDTA 或肝素作为抗凝剂采集标本，并将标本在采集后的 30 分钟内于 2-8oC 1000×g 离心 15 分钟，取上清即可检测，或将上清置于-20oC或-80oC 保存，但应避免反复冻融。

3. 组织匀浆：

1） 取适量组织块，于预冷PBS（0.01mol/L, pH 7.0-7.2）中清洗去除血液，称重后备用（组织块较大需先剪碎后再匀浆）；

2） 可同时选用多种匀浆方法达到较好的破碎效果：首先将组织块移入玻璃匀浆器，加入5-10mL 预冷PBS 进行充分研磨，该过程需在冰上进行（有条件实验室可选用机器匀浆）；得到的匀浆液可再利用超声破碎或反复冻融 进一步处理（超声破碎过程中注意冰浴降温；反复冻融法可重复2次）。

3） 将制备好的匀浆液于5000×g 离心5 分钟，留取上清即可检测。

4. 细胞裂解液：

1）贴壁细胞需要先用胰酶消化，离心收集细胞（悬浮细胞可直接离心收集）；

2）将收集到的细胞用冷PBS 洗3 次；

3）物理方法裂解细胞（可先超声破碎细胞，再反复冻融）：

i 超声破碎：取适量PBS 重悬细胞，用一定功率的超声波处理细胞悬液，使细胞急剧震荡破裂。

ii 反复冻融：将待破碎的细胞在-20 oC 以下冰冻，室温融解，反复3 次，使细胞溶胀破碎。

4）将标本于2-8 oC 1500×g 离心10 分钟，收集上清备用。

5. 细胞培养上清或其它生物标本：

请 1000×g 离心 20 分钟，取上清即可检测，或将上清置于-20oC 或-80oC 保存，但应避免反复冻融。

注意：

1.         以上标本均需密封保存，4oC保存应小于1周，-20oC不应超过1个月，-80oC不应超过2个月。

2.         标本使用前应缓慢均衡至室温，不应加热使之融解。

3.         实验前红细胞裂解液必须用标准品稀释液稀释。

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