定量PCR检测试剂盒使用时应注意以下方面
浏览次数:535发布日期:2021-11-19
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的适用范围广,包含一系列生物样品,如血液、动物、植物、真菌、酵母、细菌和病毒等,简化实验步骤,减少大量的核酸纯化试剂的消耗,问研究人员节约大量的时间和科研费用。对于商检、CDS、疾病诊断的用户,还可以在很大程度上降低污染,包含操作人员的安全。
定量PCR检测试剂盒使用时应注意以下方面:
1.保存
未拆封的试剂盒,请于-20℃保存;拆封之后,应在4℃保存。在试剂消耗量较少的实验室,可以考虑将试剂盒的按照组分单独分装,后保存在-20℃。
2.配置
PCR试剂盒内所含各组份都是混合物,在静置情况下会发生分层现象,因此试剂盒现配现用,震荡混匀,避免反复冻融,避免预混。其中,反复冻融将大幅缩短试剂盒使用寿命。
在扩增体系的选择时,尽量选择标准体系,再根据检材情况加入模板,之后切勿忘记以PCR用水补足扩增体系。
3.切勿预混
因试剂盒中酶的活性较高,将各组份按照比例混合之后,即使没有达到它的适温度,但也可能发生与引物结合,导致实验结果出现丢位点或者杂合子纯化等情况。
4.阴阳性参照
实验结果会受提取、扩增和电泳等多个环节的影响,因此,每次扩增实验都应该添加一组阴阳性参照。这样,当结果异常的时,我们就可以结合阴阳性参照的表现,排查问题出在哪个环节。
5.阳性参照是否通用
虽然多数试剂盒的阳性参照都是007,但是案件试剂盒和建库试剂盒的阳性参照浓度不同,通常来说案件试剂盒的浓度更低,扩增时需选用试剂盒相对应的阳性参照。