文氏密螺旋体探针法荧光定量PCR试剂盒RNA质量检测步骤

 文氏密螺旋体探针法荧光定量PCR试剂盒RNA质量检测步骤：

1）紫外吸收法测定

先用稀释用的TE溶液将分光光度计调零。然后取少量RNA溶液用TE稀释（1:100）后，读取其在分光光度计260nm和280nm处的吸收值，测定RNA溶液 浓度和纯度。

浓度测定

A260下读值为1表示40 g RNA/ml。样品RNA浓度(g/ml)计算公式为：A260 ×稀释倍数× 40 g/ml。具体计算如下：

RNA溶于40 l DEPC水中，取5ul，1:100稀释至495的TE中，测得A260 = 0.21

RNA 浓度= 0.21 ×100 ×40 g/ml = 840 g/ml 或 0.84 g

取5ul用来测量以后，剩余样品RNA为35 l，剩余RNA总量为：

35 l × 0.84 gl = 29.4 g

②纯度检测

RNA溶液的A260/A280的比值即为RNA纯度，比值范围1.8到2.1。

2）变性琼脂糖凝胶电泳测定

①制胶

1g琼脂糖溶于72ml水中，冷却至60℃，10 ml的10× MOPS电泳缓冲液和18 ml的37% 甲醛溶液(12.3 M)。

10×MOPS电泳缓冲液

浓度 成分

0.4M MOPS，pH 7.0

0.1M 乙酸钠

0.01M EDTA

灌制凝胶板，预留加样孔至少可以加入25 l溶液。胶凝后取下梳子，将凝胶板放入电泳槽内，加足量的1×MOPS电泳缓冲液至覆盖胶面几个毫米。

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